详细梳理菌种保藏的8大方法、8类机构！

原理：低温

方法：将培养好的斜面菌种，置于4-5℃冰箱保存，定期移植到新的斜面培养基上继续保藏。一般保存期3-6个月。

注意事项：冰箱的温度；培养基水分蒸发情况（用橡皮塞代替棉塞）。

优点：简便，适合于实验室中菌种的短期保藏。

缺点：短期内多次传代，易引起菌种变异、退化，染菌几率增加。

适用菌种：细菌、放线菌、酵母、丝状真菌等短期保藏。

原理：低温、缺氧。

保藏期：4-5℃冰箱保存期6-12个月。

适用菌种：各种好气性细菌。

液体石蜡作用：防止培养基失水并隔绝氧气。

液体石蜡保藏法：（在斜面菌种上加入灭菌后的液体石蜡）适用于不能以石蜡为碳源的菌种，如固氮菌、分枝杆菌、沙门氏菌、毛霉、根霉等。

适用菌种：产孢子的真菌。

该法麸皮、大米、小米或麦粒等天然农产品为产孢子培养基，使菌体产生大量的休眠体（孢子）后加以保存。

注意：控制适当的水分。

保存期：1-3年。

原理：低温、寡营养。

保藏期：4-5℃冰箱保存期1-2年。

适用菌种：产孢子的丝状真菌和放线菌以及产芽孢的细菌。

• 过筛、灭菌并干燥的沙土为保藏介质。

• 可用硅胶、磁珠或多孔玻璃珠，但适于这些载体的微生物不多，保存期短，不及沙土实用。

原理：在低温下迅速地将细胞冻结以保持细胞结构完整，然后在真空下使水分升华（最有效方法之一）。

步骤：

1. 安瓿瓶的处理：灭菌；

2. 保护剂：其作用是保持菌种细胞的生命状态，尽量减少冷冻干燥对微生物引起的冻结损伤。常采用脱脂牛奶或血清。

3. 菌悬液制备：与保护剂混合，放在安瓿瓶内；

4. 冷冻干燥（用低温酒精或干冰-15℃以下，使之速冻，在低温下用真空泵抽干）。

1. 保藏期：将安瓿瓶熔封，低温4-5℃，保藏5-10年。

   影响保藏效果的因素：菌种、菌龄和样品中的含水量。

   适用菌种：适用于各种微生物。

   特点：保藏期长、变异小、适用范围广，较理想保藏方法。

   6、液氮保藏法

   原理：低温。

   悬浮介质：10％甘油或5％的二甲亚砜。

   机理：甘油或二甲亚砜可进入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞。

   甘油一般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。

   适用菌种：适用于所有微生物、动植物细胞保藏。

   保藏期：置液氮内（-196℃），保存5-10年。

   特点：保藏期最长，但保藏费用高，仅用于保存经济价值高、容易变异，或其他方法不能长期保存的菌种。

   7、悬液保藏法

   原理：寡营养保存，将菌种悬于不含养分的溶液。

   适用菌种：丝状真菌、酵母状真菌及肠道科细菌。

   保藏期：10℃或室温保藏（18-20℃）1年以上。

   8、低温保藏法

   方法：在封密性能好的螺口小管中，加入12ml菌液，封口后直接放入低温冰箱中保藏。
   

   保藏期：-20℃保藏期1年左右。

   
   

   二、菌种保藏的注意事项

• 休眠体如孢子或芽胞；

• 培养时间：过短，容易死亡；过长，生产性能衰退；

• 培养温度：一般采用生长最适温度培养至孢子成熟的菌种进行保藏效果好。

• 斜面保藏所用的培养基，碳源比例应少些，营养成分贫乏些较好；

• 沙土管保藏需将沙和土充分洗净，以防其中过多的有机物，影响菌的代谢或经灭菌后产生一些有毒物质；

• 冷冻干燥所用的保护剂，有不少经加热分解或变性的物质，如还原糖和脱脂乳，过度加热易形成有毒物质。

• 冷冻干燥时，冻结速度缓慢易导致细胞内形成较大的冰晶，对细胞结构造成损伤；

• 真空干燥程度影响细胞结构，加入保护剂为了减轻冷冻干燥所引起的细胞结构破坏。

• 普通微生物菌种保藏管理中心（CCGMC）

• 农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）

• 工业微生物菌种保藏管理中心（CICC）

• 医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）

• 中国抗生素菌种保藏管理中心（CACC）

• 兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）

• 林业微生物菌种保藏管理中心（CFCC）

• 中国典型培养物保藏管理中心（CCTCC）